[科普中國]-索森DNA吸印技術(shù)

索森DNA吸印雜交技術(shù)根據(jù)毛細管作用的原理，使在電泳凝膠中分離的DNA片段轉(zhuǎn)移并結(jié)合在適當(dāng)?shù)臑V膜上，然后通過同DNA或RNA探針的雜交作用，檢測這些被吸印的DNA片段。這種方法由索森(E.Southern)于1975年首先提出并設(shè)計，故叫索森吸印雜交技術(shù)。

簡介索森DNA吸印雜交技術(shù)根據(jù)毛細管作用的原理，使在電泳凝膠中分離的DNA片段轉(zhuǎn)移并結(jié)合在適當(dāng)?shù)臑V膜上，然后通過同DNA或RNA探針的雜交作用，檢測這些被吸印的DNA片段。這種方法由索森(E.Southern)于1975年首先提出并設(shè)計，故叫索森吸印雜交技術(shù)。1

操作應(yīng)用硝酸纖維素濾膜進行索森吸印實驗，只要當(dāng)該濾膜結(jié)合上兩種互補鏈之一，便能夠成功地發(fā)生核酸的雜交作用。瓊脂糖凝膠電泳分離的DNA片段，經(jīng)過堿變性作用之后，平鋪在已用電泳緩沖液飽和了的兩張濾膜上，在凝膠上部覆蓋一張硝酸纖維素濾膜，其上加一疊干濾紙，最后再加載一重物。這樣由于干濾紙的吸引作用，凝膠中的單鏈DNA便隨著電泳緩沖液一道轉(zhuǎn)移，而一旦同硝酸纖維素濾膜接觸，就會牢固地縛結(jié)在它上面。這些DNA片段(單鏈)系嚴格按照它們在凝膠中的譜帶模式原位吸印于濾膜上的，在80℃下烘烤2小時，DNA片段就會固定在硝酸纖維素濾膜上。然后，將此濾膜移放在加有放射性同位素標(biāo)記探針的溶液中，進行核酸雜交。這些探針是同被吸印的單鏈核酸互補的RNA或DNA，一旦它們同硝酸纖維素濾膜上的單鏈互補DNA雜交后，就很難再解鏈。用漂洗法洗去沒有雜交的游離探針分子，用X光底片所得的放射自顯影圖片，同溴化乙錠染色的凝膠譜帶作對照，便可檢出同探針的核苷酸序列同源的限制片段。1

應(yīng)用薩瑟恩吸引雜交方法幾乎可以同時構(gòu)建出DNA分子的物理圖和遺傳圖，在分子生物學(xué)及基因克隆實驗中的應(yīng)用極為普遍。1

本詞條內(nèi)容貢獻者為:

胡芳碧 - 副教授 - 西南大學(xué)