[科普中國]-無花果絲孢酵母

脂肪酶的概述

近三十年來，脂肪酶的應(yīng)用開發(fā)已從食品、助消化劑、化妝品、皮革加工、洗滌劑等領(lǐng)域擴(kuò)伸到脂肪酸生產(chǎn)、油脂加工、有機(jī)合成化工產(chǎn)品、香料及藥物制備。八十年代以來，脂肪酶在應(yīng)用方面的開發(fā)研究加快了步伐，除水解油脂已進(jìn)人工業(yè)化外，利用脂肪酶不需要輔酶就能催化正逆反應(yīng)用其專一性等優(yōu)點，在有機(jī)溶劑中催化酶合成及酯交換反應(yīng)、改性油脂的生產(chǎn)、消旋化合物拆分等眾多領(lǐng)域顯示出開發(fā)前景。

脂肪酶可分為動物脂肪酶、植物脂肪酶及微生物脂肪酶。微生物脂肪酶可用發(fā)酵法進(jìn)行工廠化生產(chǎn)，生產(chǎn)周期短、規(guī)模大。

無花果絲孢酵母的分離產(chǎn)脂肪酶菌株初篩方法：將待分離樣品稀釋法分離為純菌株，將各純菌株接種于含有溴甲酚紫的油脂同化平板上，30℃培養(yǎng)1小時。產(chǎn)脂肪酶的菌株能分解油脂生成脂肪酸，使溴甲酚紫由紫色變?yōu)辄S色，形成變色圈。以菌落直徑與變色圈直徑之比為初篩依據(jù)。

產(chǎn)脂肪酶菌株復(fù)篩方法：將待測菌接于100mL發(fā)酵培養(yǎng)基中，30℃，搖床培養(yǎng)，定時測其脂肪酶活性。

脂肪酶活性測定方法：脂肪酶活性單位定義：37℃10分鐘油脂水解反應(yīng)。將lml發(fā)酵液每分鐘分解底物產(chǎn)生lμmol脂肪酸定義為一個酶活單位1。

無花果絲孢酵母的鑒定屬的鑒定（1）液體培養(yǎng)特征：麥芽汁培養(yǎng)基28℃靜置培養(yǎng)48小時，培養(yǎng)液較清，液面上形成一層酸膜，沒有氣泡不發(fā)酵。

(2)菌落形態(tài)：麥芽汁平板接種，28℃，7天，菌落白色，較大，表面干燥，有放射狀菌絲線，邊緣呈細(xì)微毛邊。20℃，15天后菌落長滿平板。

(3)個體形態(tài)：馬鈴薯固體培養(yǎng)基畫線接種后，斜插入一蓋片，28℃培養(yǎng)5天，顯微鏡觀察蓋片上菌絲形態(tài)：有較長的真菌絲，菌絲有橫隔膜，在菌絲的末尾一端有許多橫隔膜，把菌絲切成條磚形，斷裂成單個細(xì)胞，排列成一左傾一右傾的細(xì)胞斷鏈，即形成節(jié)孢子。亦有芽殖，為多邊芽殖。無八疊式細(xì)胞群。

(4)孢子鑒定：不形成子囊飽子，不形成擲孢子，也不形成冬孢子及擔(dān)孢子，顯微鏡下觀察有大量節(jié)孢子，也有少量厚壁孢子。

由以上特征，據(jù)《酵母菌分類學(xué)》，該菌為真菌門、半知菌亞綱、叢梗孢目、隱球酵母種，絲孢酵母屬(Trichosporon)。

種的鑒定據(jù)王利1984年版《酶母菌分類學(xué)》，絲孢酵母屬共有15個種，按鑒定檢索表進(jìn)行生理試驗，結(jié)果為：不同化硝酸鹽，不發(fā)酵葡萄糖，同化乳糖，無八疊狀細(xì)胞群，不同化肌醇，37℃能生長。據(jù)此判斷菌株為無花果絲孢酵母(Trichospfigucriac)。

無花果絲孢酵母產(chǎn)脂肪酶條件的研究蛋白胨4%，橄欖油0.5%，KH2PO40.1%，MgSO40.1%，(NH4)2SO40.1%，pH5.0。在此基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入不同濃度的各種碳源，30'℃，搖瓶發(fā)酵48小時，測其酶活性。在0.5%的甜菜糖蜜為碳源時，酶活性最高，相對酶活(以葡萄糖碳源的酶活為100%)為407%。而葡萄糖碳源對產(chǎn)脂肪酶不利，可能是含葡萄糖培養(yǎng)基滅菌后生成了抑制酶形成的物質(zhì)，或是葡萄糖效應(yīng)抑制脂肪酶誘導(dǎo)生成的結(jié)果。底物類油脂可以作為碳源。

無花果絲孢酵母產(chǎn)脂肪酶性質(zhì)的研究將無花果絲孢酵母的30℃，48小時振蕩培養(yǎng)物離心去菌體后，加入65%飽和度的硫酸鐵沉降酶蛋白，離心收集沉降物后，用透析膜透析硫酸鐵，再用聚乙二醇包埋法和低溫干燥法制取酶粉。對該粗酶制劑進(jìn)行酶性質(zhì)的研究。

無花果絲孢酵母產(chǎn)脂肪酶的最適作用溫度在25℃-52℃溫度范圍內(nèi)測定了酶活性與溫度的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)最適作用溫度為42℃。

無花果絲孢酵母產(chǎn)脂肪酶的最適作用pH在pH5.0-10.0范圍內(nèi)，測定了酶在不同pH緩沖體系下的活性，較適pH是7.0-9.0，pH8時酶活性最高。

無花果絲孢酵母產(chǎn)脂肪酶的熱穩(wěn)定性將酶分別在蒸餾水和pH6.5的Na2HPO4-檸檬酸緩沖液中于不同溫度下恒溫水浴處理15分鐘后，測定其殘余酶活性，發(fā)現(xiàn)一定的溫度將使酶失活，而且酶在不同的體系中受熱，其耐熱性不同2。