[科普中國]-肉與肉制品：維生素C含量測定

原理

試樣中的維生素C用偏磷酸提取后,經(jīng)2,6-二氯靛酚氧化成脫氫維生素C,與鄰苯二胺反應,生成具有紫藍色熒光的喹(口惡)啉衍生物。在激發(fā)波長350nm,熒光波長430nm處測定其熒光強度。

試劑抗壞血酸標準溶液：1mg/mL

精確稱取抗壞血酸50mg,用5%偏磷酸溶液溶解并定容到50mL棕色容量瓶中。測定時再稀釋到25μg/mL。

偏磷酸：5%溶液。

乙酸鈉(GB 693):50%溶液。

硼酸(GB 628)-乙酸鈉溶液。

將3g硼酸溶于50%乙酸鈉溶液中并稀釋到100mL。

95%乙醇(GB 678):50%溶液。

硫脲：3%溶液。

將3g硫脲溶于50%乙醇溶液中并稀釋到100mL(臨用前配制)。

鹽酸鄰苯二胺：0.02%溶液。

2,6-二氯靛酚:0.2%溶液。

儀器與設備實驗室常規(guī)設備;

熒光分光光度計；

絞肉機:孔徑不超過4mm。

試樣按GB 9695.19取樣;

取有代表性的試樣200g,于絞肉機中至少絞兩次并使其混勻,在密閉容器中于4℃下貯存?zhèn)溆谩?/p>

分析步驟提取稱取試樣2～5g(精確至0.001g)置于燒杯中,加入20mL50%偏磷酸溶液,充分攪拌后,全部移入100mL容量瓶中并定容?；靹蚝筮^濾，濾液備用。

測定分別取濾液1mL加入2支試管中,取標準抗壞血酸溶液(25μg/mL)1mL分別加入另外2支試管,向各管中加入2,6-二氯靛酚溶液0.1mL,充分混勻,此時溶液呈微紅色,再加入硫脲溶液0.1mL搖勻,使過量的2,6-二氯靛酚還原(粉紅色剛剛褪去)。取試樣管、標準管各1支分別加入乙酸鈉溶液1mL;另2支為空白管,分別加入硼酸—乙酸鈉溶液1mL搖勻。在室溫下放置15min,分別加入鹽酸鄰苯二胺溶液5mL搖勻后在暗處放置35min。以激發(fā)波長350nm,發(fā)射波長430nm,測定生成物的熒光強度。