[科普中國(guó)]-肉與肉制品聚磷酸鹽測(cè)定

原理

用三氯乙酸提取肉和肉制品中的聚磷酸鹽，提取液經(jīng)乙醇、乙醚處理后，在微晶纖維素薄層層析板上分離，通過噴霧顯色，檢驗(yàn)聚磷酸鹽。

試劑如無特別說明，所有試劑均為分析純，試驗(yàn)用水應(yīng)符合GB/T 6682的要求。

（1）異丙醇。

（2）硝酸。

（3）四水合鉬酸銨溶液（75g/L）：稱取75g四水合鉬酸銨，用水溶解并定容至1000mL。

（4）氫氧化氨。

（5）酒石酸。

（6）焦亞硫酸鈉（150g/L）：稱取150g焦亞硫酸鈉，用水溶解并定容至1000mL。

（7）亞硫酸鈉（200g/L）：稱取200g亞硫酸鈉，用水溶解并定容至1000mL。

（8）1-氨基-2-奈酚-2-磺酸。

（9）乙酸鈉。

（10）三氯乙酸溶液（135g/L）：稱取135g三氯乙酸，用水溶解并定容至1000mL。

（11）乙醚。

（12）乙醇（95%）。

（13）可溶性淀粉。

（14）微晶纖維素。

（15）標(biāo)準(zhǔn)參比混合液

在100mL水中溶解下列物質(zhì)：

磷酸二氫鈉：200mg；

焦磷酸四鈉：300mg；

三磷酸五鈉：200mg；

六偏磷酸鈉：200mg。

標(biāo)準(zhǔn)參比混合液在4℃條件下可穩(wěn)定至少四周。

（16）展開劑：

將140mL異丙醇、40mL三氯乙酸溶液和0.6mL氫氧化銨混合均勻，保存于密封瓶中。

（17）顯色劑I：

量取50mL硝酸、50mL四水合鉬酸銨溶液，混合均勻，在上述溶液中溶解10g酒石酸（現(xiàn)用現(xiàn)配）。

（18）顯色劑II

將195mL焦亞硫酸鈉溶液和5mL亞硫酸鈉溶液混勻，然后稱取0.5g 1-氨基-2-奈酚-2-磺酸溶于上述溶液中，在稱取40g乙酸鈉溶于與此溶液中，該溶液貯存于密閉的棕色瓶中，可在4℃條件下保存一周。

儀器與設(shè)備實(shí)驗(yàn)室常規(guī)儀器及下列儀器。

（1）機(jī)械設(shè)備：用于試樣的均質(zhì)。包括：絞肉機(jī)、斬拌機(jī)等肉類組織粉碎機(jī)。

（2）均漿器。

（3）涂布器（涂布厚度0.25mm）。

（4）玻璃板（10×20cm、5×20cm）。

（5）層析缸。

（6）微量注射器。

（7）吹風(fēng)機(jī)（有冷、熱風(fēng)擋）。

（8）噴霧器。

（9）干燥箱

（10）干燥器。

分析步驟試樣準(zhǔn)備按GB∕T 9695.19取樣。，取有代表性的樣品不少于200 g。使用適當(dāng)?shù)臋C(jī)械設(shè)備將試樣均質(zhì)。

均質(zhì)后的試樣應(yīng)盡快分析，若不立即分析，應(yīng)密封冷藏貯存，防止變質(zhì)和成分發(fā)生變化。存儲(chǔ)的試樣在啟用適應(yīng)重新混勻。

薄層板的制備將可溶性淀粉0.3g溶于90mL沸水中，冷卻后加入15g微晶纖維素粉，用均漿器勻漿1min。用涂布器把漿液涂在玻璃板上，鋪成0.25mm的漿層，在室溫下自然干燥1h，然后在100℃烘箱中加熱10min，取出立即放入干燥器中。也可用商品微晶纖維素板。

提取液的制備將50mL 50℃溫水倒入裝有50g試樣的燒杯中，立即充分?jǐn)嚢瑁尤?0g三氯乙酸，徹底攪拌均勻。放入冰箱冷卻1h后用扇形濾紙過濾。

若濾液渾濁，加入同體積的乙醚并搖勻，用吸管吸去乙醚，再加入同體積的乙醇，振搖1min，靜置數(shù)分鐘后在用扇形濾紙過濾。

薄層層析分離

將適量的展開劑倒入層析缸中，使深度為5-10mm，蓋上蓋，避光靜置30min。

用微量注射器吸取提取液3uL，若經(jīng)過澄清處理的提取液取6uL，在距薄層板板底約兩厘米處點(diǎn)樣，每次點(diǎn)樣1uL，使點(diǎn)的直徑盡量小，邊點(diǎn)邊用吹風(fēng)機(jī)冷風(fēng)檔吹干。

注：避免使用熱風(fēng)吹干，以防止磷酸鹽水解。

用同樣的方法，將標(biāo)準(zhǔn)參比液3uL點(diǎn)在同一塊板上，距樣品點(diǎn)1-2.5cm，距板底距離與樣品點(diǎn)一致。

打開層析缸，迅速而小心地把點(diǎn)好樣的薄層板放入缸中，蓋上蓋，在室溫下避光展開。

展開到溶劑前沿上升約10cm處，取出薄層板，放入60℃干燥箱中干燥10min，或在室溫下干燥30min，或用吹風(fēng)機(jī)冷風(fēng)檔吹干。

磷酸鹽的檢驗(yàn)將展開過的薄層板垂直立在通風(fēng)櫥中，用噴霧器把顯色劑I均勻地噴在薄板上，使之顯現(xiàn)出黃斑。

用吹風(fēng)機(jī)吹干薄層板后，放入100℃干燥箱中至少干燥1h，把硝酸全部去除，將薄層板從干燥箱中取出，證實(shí)是否有刺鼻的硝酸味道。

薄層板冷卻至室溫后，放入通風(fēng)櫥中，噴顯色劑II，使之呈現(xiàn)出明顯的藍(lán)班。

結(jié)果將試樣斑點(diǎn)與聚磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)混合液斑點(diǎn)的比移值相比較，計(jì)算其Rf。

正磷酸鹽的斑點(diǎn)經(jīng)?？梢?如果樣品中含有高濃度的磷酸鹽,也可以看見二磷酸鹽或聚合磷酸鹽的斑點(diǎn)。

參比混合液磷酸鹽的Rf值如下：

正磷酸鹽：0.70-0.80

焦磷酸鹽：0.35-0.50

三磷酸鹽：0.20-0.30

六偏磷酸鹽：01