[科普中國(guó)]-肉與肉制品脂肪酸測(cè)定

原理

游離脂肪在三氟化硼催化下，進(jìn)行甘油酯的皂化和游離脂肪酸的酯化，然后用氣相色譜進(jìn)行分析，用面積歸一法測(cè)定其組成。

試劑如無(wú)特別說(shuō)明，所用試劑均為分析純。

（1）水：應(yīng)符合GB/T 6682-200中三級(jí)水的要求。

（2）氫氧化鈉甲醇溶液（0.5mol/L）：將2g氫氧化鈉溶于100mL含水量不超過(guò)0.5%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）的甲醇中。該溶液的存放時(shí)間較長(zhǎng)時(shí)，可能形成少量白色的碳酸鈉沉淀，但不會(huì)影響甲酯的制備。

（3）三氟化硼甲醇溶液：12%-15%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）。

（4）異辛烷（2,2,4-三甲基戊烷）：色譜純。

（5）無(wú)水硫酸鈉。

（6）飽和氯化鈉溶液。

（7）氫氣：純度不小于99.9%，無(wú)有機(jī)雜質(zhì)。

（8）氮?dú)猓和耆稍?，純度不小?9.999%。

（9）空氣：無(wú)有機(jī)雜質(zhì)。

（10）參照標(biāo)準(zhǔn)物：純脂肪酸甲酯的混合物或已知油脂組成的甲酯，其組成與待分析脂類相似。

儀器和設(shè)備實(shí)驗(yàn)室常用設(shè)備。

氣相色譜儀，配備FID檢測(cè)器。

試樣按GB/T 9695.1的規(guī)定，制備試樣。

分析步驟脂肪酸甲酯的制備三氟化硼有毒，下列操作應(yīng)在通風(fēng)櫥中進(jìn)行，玻璃儀器用后，應(yīng)立即用水沖洗。

試樣稱取

稱取脂肪適量。根據(jù)稱取脂肪量的多少按下表選擇燒瓶及試劑。

皂化

將樣品置于燒瓶中，加入適量氫氧化鈉甲醇溶液（0.5mol/L）及脫脂沸石。將冷凝管固定于燒瓶上，水浴回流，至油滴消失?；亓魉俣瓤刂圃诿?0-60s一滴，通常需5-10min。采用移液管或自動(dòng)加液器從冷凝管上不加入適量的三氟化硼甲醇溶液與沸騰的溶液中。

甲酯異辛烷溶液的制備

按皂化步驟繼續(xù)煮沸3min，含有長(zhǎng)鏈脂肪酸的油脂（例如魚油），繼續(xù)煮沸30min，經(jīng)冷凝管上部加入適量的異辛烷停止加熱，移去冷凝管。不等燒瓶冷卻，立即加入20mL飽和氯化鈉溶液。蓋上瓶蓋，用力振搖至少15s繼續(xù)加入飽和氯化鈉溶液至燒瓶頸部。吸取上層異辛烷溶液1-2mL于試管中，加適量無(wú)水硫酸鈉脫水，可直接取一定量注入氣相色譜儀中。

脂肪酸甲酯的儲(chǔ)存

制備樣品應(yīng)盡快分析。不能盡快分析時(shí)，可將脂肪酯的異辛烷溶液在惰性氣體保護(hù)下短期冷藏貯存在冰箱中。

較長(zhǎng)時(shí)間貯存時(shí)可加入一定濃度而不影響分析的抗氧化劑防止甲酯的自動(dòng)氧化。例如：0.05g/L2,6-二叔丁基對(duì)甲酚（BHT）溶液。

含丁酸的甲酯只能儲(chǔ)存于密封的安瓿瓶中，應(yīng)采取特殊的保護(hù)措施，以避免罐裝和密封期間蒸發(fā)損耗。

色譜條件a）色譜柱：innowax彈性適應(yīng)毛細(xì)管柱（30m×0.25mm×0.25μm），或相當(dāng)者；

b）載氣（氮?dú)猓汉懔?.0mL/min；

c）柱溫：程序升溫，應(yīng)將所有組分洗脫；

d）進(jìn)樣口溫度：200℃；

e）進(jìn)樣量：0.1uL-1uL，如果檢測(cè)痕量組分試樣量可以增大（至10倍）；

f）空氣流速：350mL/min；

g）氫氣流速：30mL/min。

定性分析相同的操作條件下，以保留時(shí)間定性。

定量分析面積歸一法。

分析結(jié)果計(jì)算計(jì)算通過(guò)測(cè)定相應(yīng)峰面積對(duì)所有成分峰面積總和的百分?jǐn)?shù)來(lái)計(jì)算給定組分i的含量，用甲酯的質(zhì)量分?jǐn)?shù)表示。

式中：

Xi：甲酯的質(zhì)量分?jǐn)?shù)（%）；

Ai：成分i的峰面積；

∑Ai：全部成分峰面積之和；

校正因子計(jì)算在某些情況下，特別是存在碳原子數(shù)少于八的脂肪酸或有二級(jí)集團(tuán)的脂肪酸，或者需要高精確度時(shí)，應(yīng)使用校正因子將峰面積的百分?jǐn)?shù)轉(zhuǎn)換成組分的質(zhì)量分?jǐn)?shù)。

校正因子是在與試樣相同的操作條件下，通過(guò)分析已知組成的參照標(biāo)準(zhǔn)物來(lái)測(cè)定。

對(duì)于此種參照標(biāo)準(zhǔn)物，成分i的質(zhì)量分?jǐn)?shù)可由下式求出：

式中：

X2:參照標(biāo)準(zhǔn)物成分i的質(zhì)量分?jǐn)?shù)（%）；

mi:參照標(biāo)準(zhǔn)物中組分i的質(zhì)量；

∑mi：參照標(biāo)準(zhǔn)物中各組分的總質(zhì)量。

按下式有參照標(biāo)準(zhǔn)物的色譜圖計(jì)算組分i的百分比（面積/面積）：

式中：

X3:參照標(biāo)準(zhǔn)物成分i的面積分?jǐn)?shù)（%）；

Ai:成分i的峰面積；

∑Ai：全部成分峰面積之和。

則校正因子Ki可按下式計(jì)算：

通常，校正因子是以對(duì)棕櫚酸的校正因子Kc16的相對(duì)值來(lái)表示的，故此相對(duì)校正因子K’可換算為：

因此，試樣中每種組分i的含量表示為甲酯的質(zhì)量分?jǐn)?shù)

式中：

X4：甲酯的質(zhì)量分?jǐn)?shù)（%）；

計(jì)算結(jié)果保留至小數(shù)點(diǎn)后一位。

精密度

同一分析者用同一儀器對(duì)同一試樣連續(xù)進(jìn)行兩次測(cè)定的誤差，對(duì)于含量大于5%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）的組分，相對(duì)偏差應(yīng)不大于3%，絕對(duì)誤差應(yīng)不超過(guò)1%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）；對(duì)于含量小于5%的組分，絕對(duì)誤差應(yīng)不大于0.2%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）。1