[科普中國(guó)]-肉與肉制品中喹乙醇?xì)埩袅康臏y(cè)定

原理

用乙腈和水提取樣品中的喹乙醇，提取液經(jīng)液液凈化后，濃縮，定容作為待測(cè)溶液，取一定量注入高效液相色譜儀，經(jīng)分離，用紫外檢測(cè)器檢測(cè)，與標(biāo)準(zhǔn)比較定量。

試劑與儀器、設(shè)備試劑（1）水：三級(jí)水。

（2）乙腈：分析純。

（3）乙腈：色譜純。

（4）正己烷：分析純，重蒸餾，用乙腈飽和。

（5）喹乙醇標(biāo)準(zhǔn)品：純度99%以上。

（6）喹乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液：精確稱(chēng)取喹乙醇標(biāo)準(zhǔn)品10 mg用甲醇溶解并定容至100 mL，配成濃度為0.100 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，使用時(shí)逐級(jí)稀釋成適當(dāng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

儀器和設(shè)備（1）高效液相色譜儀：附紫外檢測(cè)器。

（2）組織搗碎機(jī)。

（3）離心機(jī)：3000 r/min～5000 r/min。

（4）旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。

分析步驟抽樣（1）零散樣品
若成堆產(chǎn)品，則在堆放空間的四角和中間設(shè)采樣點(diǎn)，每點(diǎn)從上、中、下三層取若干小塊混為一份樣品；若零散樣品，則隨機(jī)從3～5片胴體上取若干小塊混為一份樣品。每份500 g～l 500 g。

（2）檢驗(yàn)批
以不超過(guò)5000箱為一檢驗(yàn)批。同一檢驗(yàn)批內(nèi)商品應(yīng)具有同一特征，如包裝、標(biāo)記、產(chǎn)地、規(guī)格、等級(jí)等。

（3）抽樣數(shù)量
①肉
a) 500箱及以下取5箱；
b)501～1000箱取7箱；
c) 1001～3000箱取11箱；
d)3001～4000箱取13箱；
e)4001～5000箱取15箱。
②罐頭
a) 500箱及以下取5箱；
b)501～1000箱取7箱；
c)1001～3000箱取11箱；
d) 3001～4000箱取13箱；
e)4001～5000箱取15箱。
（4）抽樣工具及方法
①肉
每箱取樣一包，去掉塑料薄膜，從每包肉樣中抽取肉塊不少于25g，總樣量不少于1 kg，放入清潔的容器內(nèi)，填寫(xiě)標(biāo)簽，注明品名、日期、垛位、報(bào)驗(yàn)號(hào)、申請(qǐng)單位、取樣人，并及時(shí)送交實(shí)驗(yàn)室。
②罐頭
每箱取一罐，填寫(xiě)標(biāo)簽，注明品名、日期、垛位、報(bào)驗(yàn)號(hào)、申請(qǐng)單位、取樣人，及時(shí)送交實(shí)驗(yàn)室。

試樣制備（1）肉

將所取全部樣品，充分?jǐn)囁榛靹?，取有代表性的樣品，總量不少?00 g，裝入清潔容器內(nèi)，密封，冷藏。

（2）罐頭
將所取全部樣品整罐倒出，充分?jǐn)囁榛靹?，取有代表性的樣品，總量不少?00g，裝入清潔容器內(nèi)，密封，冷藏。
注：在抽樣和制樣的操作中，應(yīng)防止樣品受到污染或發(fā)生任何變化，以保證實(shí)驗(yàn)樣品能代表總體樣本。
提取和凈化
準(zhǔn)確稱(chēng)取混合均勻的樣品20.00 g(精確到0.01g)置于組織搗碎機(jī)中加入80 mL乙腈和20 mL水，搗碎后將樣品離心，將上清液倒入500 mL分液漏斗中，向殘留物中加入50 mL乙腈，同樣均質(zhì)、離心后，將上清液合并到分液漏斗中，加入100 mL正己烷，振搖5 min，靜置分層。將乙腈層轉(zhuǎn)移到250 mL旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶中，再用20 mL乙腈清洗正己烷層，將乙腈層合并于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶中。60℃水浴將乙腈蒸至約1 mL，用流動(dòng)相定容至5 mL，經(jīng)0.45μm微孔濾膜過(guò)濾后供色譜測(cè)定。

測(cè)定色譜參考條件a) 色譜柱：ODS C183.9 mm×150 mm；
b) 流動(dòng)相：乙腈+水(10+90)；
c)流速：1.0 mL/min；
d) 溫度：35℃；
e)檢測(cè)器：紫外檢測(cè)器；
f)檢測(cè)波長(zhǎng)：380 nm。

測(cè)定根據(jù)液相色譜儀靈敏度，取標(biāo)準(zhǔn)系列各濃度20 μL分別注入液相色譜儀，測(cè)得該濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液的峰面積（峰高）。以標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度(μg/mL)為橫坐標(biāo)，峰面積（峰高）為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
取樣品溶液20μL注入液相色譜儀，測(cè)得喹乙醇的峰面積（峰高）。從標(biāo)準(zhǔn)曲線中查出相應(yīng)的濃度 (μg/mL)。

結(jié)果計(jì)算采用外標(biāo)法用峰面積（峰高）定量，按式(1)計(jì)算喹乙醇?xì)埩袅浚?/p>

式中

X——樣品中喹乙醇?xì)埩袅?，單位為毫克每千?mg/kg)；

c——樣品峰在標(biāo)準(zhǔn)曲線中查得的相應(yīng)濃度，單位為微克每毫升(μg/mL)；

V——樣品最終定容體積，單位為毫升(mL)；

V0——標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)樣體積，單位為微升(μL)；
V1——樣品溶液進(jìn)樣體積，單位為微升(μL);
m——樣品質(zhì)量，單位為克(g)；
1000--單位換算系數(shù)。

允許差本方法允許差≤10%。

最低檢出限和回收率最低檢出限本方法的最低檢出限為0.04 mg/kg。

回收率本方法的回收率在70%～86%之間。

液相色譜圖喹乙醇標(biāo)準(zhǔn)色譜圖1