[科普中國]-肉與肉制品維生素PP含量測定

原理

維生素PP經(jīng)氫氧化鈣溶液提取，與溴化氰結(jié)合，在對氨基苯乙酮作用下，生成黃色化合物，在420mm波長處測定吸光度，標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量。

試劑和材料如無特別說明，所有世紀(jì)均為分析純。

（1）水：符合GB/T 6682-2008規(guī)定的三級水。

（2）乙醇。

（3）戊醇。

（4）鹽酸溶液（6mol/L）：量取25mL鹽酸（ρ20≈1。19g/mL），用水稀釋至50mL。

（5）硫酸溶液（5mol/L）：量取13。5mL鹽酸（ρ20≈1。84g/mL），用水稀釋至50mL。

（6）硫酸溶液（1 mol/L）：量取13。5mL鹽酸（ρ20≈1。84g/mL），用水稀釋至50mL。

（7）氫氧化鈣溶液（1 mol/L）：稱取3。7g氫氧化鈣，用水溶解并稀釋至50mL。

（8）硫酸鋅飽和溶液：稱取12g硫酸鋅，在室溫下用水溶解并稀釋至20mL，如有沉淀需過濾。

（9）氫氧化鈉溶液(3 mol/L)：稱取6g氫氧化鈉，用水溶解并稀釋至50mL。

（10）氫氧化鈉溶液(1mol/L)：稱取2g氫氧化鈉，用水溶解并稀釋至50mL。

（11）10%溴化氰溶液：稱取2g溴化氰，用水溶解并稀釋至20mL。

注：溴化氰是劇毒試劑，應(yīng)戴上手套在通風(fēng)櫥里配制。

（12）2%對氨基苯乙酮溶液：稱取對氨基苯乙酮1g，用少量鹽酸溶解，用水稀釋至50mL。

（13）酚酞指示劑（10g/mL）：稱取0。5g酚酞，用乙醇溶解并稀釋至50mL。

（14）煙酸標(biāo)準(zhǔn)儲備液（1mg/mL）：稱取已干燥恒重并貯存于五氧化二磷干燥器中的煙酸標(biāo)準(zhǔn)品0。1g（準(zhǔn)確至0。001g），用5mol/L硫酸1mL溶解，轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中，定容。在℃冰箱內(nèi)保存。

（15）煙酸標(biāo)準(zhǔn)工作液：吸取煙酸標(biāo)準(zhǔn)儲備液0。25mL、0。50mL、1。00mL、2。00mL、2。50mL，分別置于100mL容量瓶中，用水定容，混勻。此標(biāo)準(zhǔn)工作液系列中煙酸的濃度分別為2。5ug/mL、5ug/mL、10ug/mL、20ug/mL、25ug/mL。

儀器與設(shè)備實驗室常規(guī)儀器及下列儀器。

（1）機(jī)械設(shè)備：用于試樣的均質(zhì)化，包括高速旋轉(zhuǎn)的切割機(jī)，或多孔板的孔徑不超過4mm的絞肉機(jī)。

（2）恒溫水浴。

（3）分光光度計。

（4）分析天平：可準(zhǔn)確稱重至±0。001g。

取樣實驗室所收到的樣品應(yīng)具有代表性且在運(yùn)輸和儲藏過程中無受損或發(fā)生變化。

取樣方法參見GB∕T 9695.19。

取有代表性的樣品200 g。

試樣制備使用適當(dāng)?shù)臋C(jī)械設(shè)備將試樣均質(zhì)。注意避免試樣的溫度超過25℃。若使用絞肉機(jī)，試樣至少通過該設(shè)備兩次。

將試樣裝入密封的容器里，防止變質(zhì)和成分變化。試樣應(yīng)在均質(zhì)化后24 h內(nèi)盡快分析。

分析步驟提取稱取試樣2g(精確到0。001g)于三角瓶中，加1mol/L氫氧化鈣溶液10mL，水40mL，混勻后，在沸水浴上提取90min，冷卻后移入100mL（V1）容量瓶中，定容?；靹蜻^濾，濾液備用。

中和吸取濾液25。00mL（V2）于50mL（V3）容量瓶中，加酚酞指示劑兩滴，用6mol/L鹽酸中和至紅色剛剛退去。加入飽和硫酸鋅溶液2mL及幾滴戊醇，用3mol/L和1mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)至粉紅色。滴加1 mol/L硫酸溶液，使粉紅色剛好褪去，用水定容，混勻，放置10 min后過濾，濾液備用。

測定分別吸取煙酸標(biāo)準(zhǔn)工作液1。00mL（V4）于具塞試管中，加水4 mL，吸取試樣液5。00mL（V5）于具塞試管中。于上述各試管中加入10%溴化氰溶液2 mL搖勻。置60～70℃水浴中保溫15min后，迅速冷卻。加入2%對氨基苯乙酮溶液1 mL，搖勻，在暗處放置15min。在420nm波長處測定吸光度。

標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制以標(biāo)準(zhǔn)工作液的濃度為橫坐標(biāo)，相應(yīng)的吸光值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

計算試樣中維生素PP的含量按下式計算：

式中：

X——試樣中維生素PP含量，mg/kg；

c——從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得待測試樣溶液中維生素PP的濃度，ug/mL；

V3——試樣溶液第二次定容的體積，mL；

V1——試樣溶液第一次定容的體積，mL；

V4——顯色用標(biāo)準(zhǔn)工作液的體積，mL；

m——試樣質(zhì)量，g；

V2——中和用試樣溶液的體積，mL；

V5——顯色用試樣溶液的體積，mL；

結(jié)果保留至小數(shù)點后一位。1