[科普中國(guó)]-肉與肉制品：維生素B1含量測(cè)定

主題內(nèi)容與適用范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了肉與肉制品中維生素 B1含量的測(cè)定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于肉與肉制品中維生素 B1含量的測(cè)定。

引用標(biāo)準(zhǔn)GB 9695.1 肉與肉制品 取樣方法

原理試樣用酸水解使維生素 B1（硫胺素）游離，維生素B1經(jīng)酶解、純化后在堿性高鐵氰化鉀作用下定量氧化成具有藍(lán)色熒光的硫色素。在激發(fā)波長(zhǎng) 365nm，發(fā)射波長(zhǎng) 435nm處測(cè)定其熒光強(qiáng)度，熒光強(qiáng)度與硫色素含量成正比，以此計(jì)算維生素 B1的含量。

試劑所用試劑均為分析純，水為蒸餾水或同等純度的水。

乙酸鈉（GB 694）：2 mol/L溶液。

鹽酸（GB 622）：0.1 mol/L溶液。

溴甲酚綠pH 指示劑：變色范圍：pH 值為4.0（綠）~5.8（藍(lán)）。0.1g 指示劑與0.05mol/L 氫氧化鈉溶液 2.8mL在瑪瑙乳缽中研磨溶解，以水稀至 200mL。

溴酚藍(lán) pH指示劑：變色范圍：pH值為 3.0（黃）~ 4.6（藍(lán)）。0.1g指示劑與 0.05mol/L

氫氧化鈉溶液 3mL在瑪瑙乳缽中研磨溶解，以水稀至 250mL。

高峰淀粉酶：10%溶液。

氯化鉀（GB 646）：25%溶液。

酸性氯化鉀溶液：每升氯化鉀溶液中加入 8.5mL濃鹽酸。

氫氧化鈉（GB 629）：15%溶液。

鐵氰化鉀（GB 644）：1%溶液。

氧化劑：1%鐵氰化鉀溶液1mL，用15%氫氧化鈉溶液稀釋至100L。臨用前配制。

異丁醇。

95%乙醇（GB 679）：20%溶液。

酸性乙醇：20%乙醇溶液用0.1mol/L 鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH 為3.4~4.3。4．14 人造沸石：市售品要經(jīng)活化處理

活化方法：將粒度 40~60目的人造沸石置于燒杯中，加約 5倍量的熱水?dāng)嚢?，靜置后傾出上清液棄去。重復(fù)此操作，直至上清液透明。接著加入 5倍量的 3%乙酸溶液攪拌浸泡10min，靜置后傾去上清液，重復(fù)此操作3 次。然后加入約5 倍量熱的酸性氯化鉀溶液，在沸水浴中加熱 25min，棄去上清液，加 3%乙酸溶液洗滌兩次后，用水反復(fù)洗至無(wú)氯離子為止（用硝酸銀溶液檢查）。將處理好的人造沸石浸沒(méi)于水中保存，也可于 80℃?zhèn)溆谩＞S生素 B1回收率要大于85%。

維生素 B1標(biāo)準(zhǔn)溶液

標(biāo)準(zhǔn)貯備液 100μg/mL：

稱取 50.0mg維生素 B1標(biāo)準(zhǔn)品于 500mL棕色容量瓶中，用酸性乙醇稀釋至刻度，置冰箱保存。

標(biāo)準(zhǔn)工作液 10μg/mL：

取標(biāo)準(zhǔn)貯備液 10.0mL，用酸性乙醇定容至 100mL棕色容量瓶中。

儀器和設(shè)備

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層析柱可控制流速為 1mL/min。準(zhǔn)備方法：將脫脂棉置于毛細(xì)管頂端防止沸石流出和控制溶液流速。把懸浮于水中的人造沸石傾入層析柱中，其高度約 10cm（約用 1.5g人造沸石）仔細(xì)洗下貯液槽壁上的人造沸石顆粒。在吸附過(guò)程中液面要始終高于沸石表面，防止柱內(nèi)有氣泡。

高壓釜。

試樣按 GB 9695.19取樣。

取有代表性的試樣200g，于絞肉機(jī)中至少兩次使其混勻，貯于密閉器中備用。盡快分析試樣。

分析步驟水解稱取 4~6g試樣（精確至 0.001g）（約含維生素 B110~25μg）于 150mL具塞錐形瓶中，加入 0.1mol鹽酸溶液 50mL，攪勻，于沸水浴中水解 30min。取出冷卻至室溫。

酶解用乙酸鈉溶液調(diào)節(jié)試樣水解液，使 pH為 4.0~4.5，用溴甲酚綠指示劑在點(diǎn)滴板上檢查。加入高峰淀粉酶溶液 5mL，混勻，在 45~50℃培養(yǎng)箱中保溫 3h。取出冷卻后 0.1mol/L鹽酸調(diào)整 pH為 3.5左右，用溴酚藍(lán)指示劑在點(diǎn)滴板上檢查。將溶液全部轉(zhuǎn)移到 100mL容量瓶中，用水稀釋至刻度。搖勻，用濾紙過(guò)濾，取濾液備用。

凈化取酶解濾液 25.0mL，注入人造沸石層析柱，層析柱流速控制在 1mL/min左右，棄去流出液。用 3份 5mL近沸熱水洗滌層析柱，棄去流出液。用 25mL60~80℃熱的酸性氯化鉀溶液分 5次洗脫維生素 B1，收集于 25mL容量瓶中，冷卻后用酸性氯化鉀溶液定容?；靹騻溆?。

氧化取 2支 40mL具塞棕色試管，加入 1.5g氯化鉀或氯化鈉。再加入凈化后的樣液 5.0mL，一支試管中加入氧化劑 3mL，立即旋搖試管，混勻，加入異丁醇 10mL萃取，塞上塞子振搖 90s。靜置分層。另一支試管作為空白對(duì)照，加入 15%氫氧化鈉溶液 3mL，旋搖混勻，加入異丁醇 10mL萃取，靜置分層，異丁醇層用無(wú)水硫酸鈉脫水。

熒光測(cè)定準(zhǔn)備好熒光分光光度計(jì)，調(diào)節(jié)激光波長(zhǎng)為 365nm，發(fā)射波長(zhǎng)為 435nm，狹縫為 5mm，取異丁醇萃取液，置于比色皿中，測(cè)定氧化樣品管中的熒光強(qiáng)度為 I，空白樣品管中的熒光強(qiáng)度為 I0。

維生素 B1標(biāo)準(zhǔn)的測(cè)定取維生素 B1標(biāo)準(zhǔn)工作液 2.0mL，于 150mL具塞錐形瓶中，同樣按 7.1~7.5條操作步驟進(jìn)行水解、酶解、凈化、氧化、測(cè)定。氧化標(biāo)準(zhǔn)管中熒光強(qiáng)度為 Q，空白標(biāo)準(zhǔn)管中熒光強(qiáng)度為 Q0。2

分析結(jié)果的計(jì)算計(jì)算公式X = （I ?I0）/(Q ?Q0) * 20/m

式中：X——試樣維生素 B1的含量，mg/kg；I——氧化樣品管中的異丁醇液的熒光強(qiáng)度；I0——空白樣品管中的異丁醇溶液的熒光強(qiáng)度；Q——氧化標(biāo)準(zhǔn)管中的異丁醇溶液的熒光強(qiáng)度；Q0——空白標(biāo)準(zhǔn)管中的異丁醇溶液的熒光強(qiáng)度；m——試樣質(zhì)量，g。

當(dāng)符合允許差規(guī)定的要求時(shí)，取兩次測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值作為結(jié)果。

允許差由同一分析者同時(shí)或相繼進(jìn)行的兩次測(cè)定結(jié)果之差不得超過(guò)其算術(shù)平均值的 20%。