[科普中國(guó)]-大腸桿菌TOP10菌株

大腸桿菌TOP10菌株，適用于高效的DNA克隆和質(zhì)粒擴(kuò)增，能保證高拷貝質(zhì)粒的穩(wěn)定遺傳。TOP10菌株基因型：F- ，mcrAΔ(mrr-hsd RMS-mcrBC)， φ80 ，lacZΔM15，△lacⅩ74， recA1 ，araΔ139Δ(ara-leu)7697， galU ，galK ，rps， (Strr) endA1， nupG。TOP10 菌株感受態(tài)細(xì)胞是采用大腸桿菌TOP10 菌株經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細(xì)胞，可用于DNA 的化學(xué)轉(zhuǎn)化。使用pUC19 質(zhì)粒檢測(cè)，轉(zhuǎn)化效率可達(dá)10的8次方個(gè)轉(zhuǎn)化子/μg質(zhì)粒DNA，-70℃保存3個(gè)月轉(zhuǎn)化效率可保持在90%以上。

大腸桿菌表達(dá)菌株DH5a菌株DH5a是一種常用于質(zhì)粒克隆的菌株。E.coli DH5a在使用pUC系列質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)化時(shí)，可與載體編碼的β－半乳糖苷酶氨基端實(shí)現(xiàn)α－互補(bǔ)?？捎糜谒{(lán)白斑篩選鑒別重組菌株。
基因型：F-，φ80dlacZΔM15，Δ(lacZYA-argF)U169，deoR，recA1，endA1，hsdR17(rk-，mk+)，phoA，supE44，λ-，thi-1，gyrA96，relA1。

BL21(DE3) 菌株該菌株用于高效表達(dá)克隆于含有噬菌體T7啟動(dòng)子的表達(dá)載體（如pET系列）的基因。T7噬菌體RNA聚合酶位于λ 噬菌體DE3區(qū)，該區(qū)整合于BL21的染色體上。該菌適合表達(dá)非毒性蛋白。
基因型：F-，ompT， hsdS（rBB-mB－），gal， dcm（DE3）。

BL21(DE3) pLysS菌株該菌株含有質(zhì)粒pLysS，因此具有氯霉素抗性。PLysS含有表達(dá)T7溶菌酶的基因，能夠降低目的基因的背景表達(dá)水平，但不干擾目的蛋白的表達(dá)。該菌適合表達(dá)毒性蛋白和非毒性蛋白。
基因型：F-，ompT hsdS（rBB-mB－），gal， dcm（DE3，pLysS ，Camr。

JM109菌株該菌株在使用pUC系列質(zhì)粒載體進(jìn)行DNA轉(zhuǎn)化或用M13 phage載體進(jìn)行轉(zhuǎn)染時(shí)，由于載體DNA產(chǎn)生的LacZa多肽和JM09編碼的LacZΔM15進(jìn)行α－互補(bǔ)，從而顯示β－半乳糖苷酶活性，由此很容易鑒別重組體菌株
基因型：recA1，endA1，gyrA96，thi－1，hsdR17，supE44，relA1，Δ（lac－proAB）/F’[traD36，proAB+，lacIq，lacZΔM15]。

TOP10菌株該菌株適用于高效的DNA克隆和質(zhì)粒擴(kuò)增，能保證高拷貝質(zhì)粒的穩(wěn)定遺傳。
基因型：F- ，mcrAΔ(mrr-hsd RMS-mcrBC)， φ80 ，lacZΔM15，△lacⅩ74， recA1 ，araΔ139Δ(ara-leu)7697， galU ，galK ，rps， (Strr) endA1， nupG。

HB101菌株該菌株遺傳性能穩(wěn)定，使用方便，適用于各種基因重組實(shí)驗(yàn)
基因型：supE44，hsdS20（rB-mB－），recA13，ara－14，proA2，lacY1，galK2，rpsL20，xyl-5，mtl-1，leuB6，thi-11。

M110或 SCS110大多數(shù)大腸桿菌菌株中含有Dam甲基化酶和Dcm甲基化酶，前者可以在GATC序列中腺嘌呤N-6位上引入甲基，后者在CCA/TGC序列的第一個(gè)胞嘧啶 C-5位置上引入甲基。 常用的菌株都會(huì)產(chǎn)生dam,dcm，從而受到甲基化的影響.
部分限制性內(nèi)切酶對(duì)甲基化的DNA不能切割，如FbaI和MboI等，一般生物公司提供的內(nèi)切酶說(shuō)明中均有說(shuō)明。
大多數(shù)酶切位點(diǎn)的甲基化不影響切割，而有些會(huì)影響，如XbaI, BclI等。而且甲基化只發(fā)生在特定序列，以XbaI為例，只有在位點(diǎn)序列旁出現(xiàn)GA或TC，該XbaI位才會(huì)被甲基化。
而要解除這種限制修飾作用通常有兩種方法：
（1）選用上述酶的同功酶，如Sau3AI，DNA識(shí)別切割位點(diǎn)與MboI相同；但不受甲基化影響；
（2）利用甲基化酶缺失的受體細(xì)胞進(jìn)行DNA的制備，如E.coli JM110和鏈霉菌等，前者Dam和Dcm甲基化酶已敲出，而后者細(xì)胞內(nèi)本就沒(méi)有甲基化酶，從這些細(xì)胞中抽提的 DNA就能被上述酶切割。

E.coli JM110要排除dam,dcm甲基化的影響，需要用特定的dam-,dcm-的菌株，如JM110
如果由JM110或 SCS110等甲基化缺失的菌株產(chǎn)生的質(zhì)粒，則不會(huì)被甲基化。

大腸桿菌表達(dá)菌株制備的感受態(tài)細(xì)胞Xl1-Blue菌株基因型：endA1 gyrA96(nalR) thi-1 recA1 relA1 lac glnV44 F‘[Tn10 proAB+ lacIq Δ(lacZ)M15] hsdR17(rK- mK+)。
特點(diǎn)：具有卡那抗性、四環(huán)素抗性和氯霉素抗性。
用途：分子克隆和質(zhì)粒提取。

BL21(DE3)菌株基因型：F– ompT gal dcm lon hsdSB(rB- mB-) λ(DE3 [lacI lacUV5-T7 gene 1 ind1 sam7 nin5])。
特點(diǎn)：該菌株用于以T7 RNA聚合酶為表達(dá)系統(tǒng)的高效外源基因的蛋白表達(dá)宿主。T7噬菌體RNA聚合酶基因的表達(dá)受控于λ噬菌體DE3區(qū)的lacUV5啟動(dòng)子，該區(qū)整合于BL21的染色體上。該菌適合于非毒性蛋白的表達(dá)。
用途：蛋白質(zhì)表達(dá)。

BL21(DE3)ply菌株基因型：F- ompT gal dcm lon hsdSB(rB- mB-) λ(DE3) pLysS(cmR)。
特點(diǎn)：該菌株帶有pLysS，具有氯霉素抗性。此質(zhì)粒還有表達(dá)T7溶菌酶的基因，T7溶菌酶能夠降低目的基
因的背景表達(dá)水平，但不干擾IPTG誘導(dǎo)的表達(dá)。 適合于毒性蛋白和非毒性蛋白的表達(dá)。
用途：蛋白質(zhì)表達(dá)

DH5α菌株基因型：F- endA1 glnV44 thi-1 recA1 relA1 gyrA96 deoR nupG Φ80dlacZΔM15 Δ(lacZYA-argF)U169, hsdR17(rK-, λ–
特點(diǎn)：一種常用于質(zhì)?？寺〉木?。 其Φ80dlacZΔM15基因的表達(dá)產(chǎn)物與pUC載體編碼的β-半乳糖苷酶氨基端實(shí)現(xiàn)α互補(bǔ)，可用于藍(lán)白斑篩選。recA1和 endA1的突變有利于克隆DNA的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA的提取。
用途：分子克隆、質(zhì)粒提取和蛋白質(zhì)表達(dá)。

JM109菌株基因型：endA1 glnV44 thi-1 relA1 gyrA96 recA1 mcrB+ Δ(lac-proAB) e14- [F‘ traD36 proAB+ lacIq lacZΔM15]hsdR17(rK-mK+)。
特點(diǎn)：部分抗性缺陷，適合重復(fù)基因表達(dá), 可用于M13克隆序列測(cè)定和藍(lán)白斑篩選。
用途：分子克隆、質(zhì)粒提取和蛋白質(zhì)表達(dá)。

TOP10 菌株TOP10 菌株感受態(tài)細(xì)胞是采用大腸桿菌TOP10 菌株經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細(xì)胞，可用于DNA 的化學(xué)轉(zhuǎn)化。使用pUC19 質(zhì)粒檢測(cè)，轉(zhuǎn)化效率可達(dá)10的8次方個(gè)轉(zhuǎn)化子/μg質(zhì)粒DNA，-70℃保存3個(gè)月轉(zhuǎn)化效率可保持在90%以上2。

本詞條內(nèi)容貢獻(xiàn)者為:

梁志宏 - 副教授 - 中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)