[科普中國(guó)]-乙肝病毒DNA檢測(cè)

乙肝病毒DNA檢測(cè)是利用DNA檢測(cè)乙肝病毒的技術(shù)方法，是判斷乙肝病毒復(fù)制的常用手段。一般的，把數(shù)值大于10的3次方認(rèn)為陽(yáng)性，把3-5次方認(rèn)為是低量復(fù)制，5-7為中等量，大于7次方為大量。乙肝兩對(duì)半并不能準(zhǔn)確的判斷病毒復(fù)制情況，DNA彌補(bǔ)了這個(gè)的不足。不過(guò)由于DNA檢測(cè)技術(shù)要求嚴(yán)格，容易受到干擾，因此，一次結(jié)果不足以說(shuō)明問(wèn)題，遇到陽(yáng)性，可以換醫(yī)院再次檢查。

DNA指的是脫氧核糖核酸，病毒的復(fù)制是靠DNA的復(fù)制來(lái)完成的，DNA的濃度越高，病毒的復(fù)制越活躍。合起來(lái)，HBV-DNA指的就是乙肝病毒的脫氧核糖核酸。

DNA檢測(cè)DNA檢測(cè)方法由于其特異性好、靈敏度高、操作簡(jiǎn)便等原因已成為物種鑒定的主要檢測(cè)方法。首先，DNA在細(xì)胞中含量相對(duì)穩(wěn)定，比蛋白質(zhì)耐熱，在產(chǎn)品的加工過(guò)程中也相對(duì)不容易被破壞，從加工產(chǎn)品中仍能提取出足夠可供分析的小片段DNA；其次，DNA信息量大，物種的差異直接反映在DNA序列的差異上?？梢愿鶕?jù)DNA上不同區(qū)域、基因、片段的進(jìn)化特點(diǎn)選擇適合的靶基因進(jìn)行檢測(cè)；第三，DNA的序列穩(wěn)定，不同組織類型、年齡和狀態(tài)影響不大；第四，由于基因技術(shù)的發(fā)展，DNA檢測(cè)技術(shù)可以發(fā)現(xiàn)含量低至幾個(gè)拷貝的基因，使分析水平從常量水平發(fā)展到痕量水平；第五，各類高精尖儀器的研發(fā)使得檢測(cè)時(shí)間大大縮短，操作也更為便捷。自動(dòng)化檢測(cè)更是有助于提高操作的精確度，防止交又污染和有害有毒物質(zhì)的損害1。

以往乙肝患者抗病毒治療的指征是：乙肝病毒e抗原陽(yáng)性（大三陽(yáng)）患者HBVDNA數(shù)值要求達(dá)到10的5次方拷貝/毫升（20000U/ml），乙肝病毒e抗原陰性（小三陽(yáng)）患者乙肝病毒DNA數(shù)值要求達(dá)到10的4次方拷貝/毫升（2000U/ml），但是10的4次方拷貝/毫升以下也不能認(rèn)為就沒(méi)有問(wèn)題了，最新的國(guó)際研究資料表明：和肝臟疾病進(jìn)展相關(guān)的病毒DNA水平域值尚不清楚，即使HBVDNA水平持續(xù)低于20000U/ml，也可能乙肝病毒情仍在進(jìn)一步發(fā)展，因此HBVDNA數(shù)值應(yīng)該越低越好，國(guó)際建議的HBVDNA檢測(cè)正常值應(yīng)該是：作用

乙肝病毒DNA檢測(cè)在乙肝檢查化驗(yàn)中使用的越來(lái)越普遍，可見乙肝病毒DNA檢測(cè)在乙肝檢查化驗(yàn)中占的分量越來(lái)越重，這是因?yàn)橐腋尾《綝NA檢測(cè)對(duì)確診乙肝和評(píng)估乙肝治療效果具有十分重要的作用2。主要表現(xiàn)于以下七個(gè)方面：

1、了解乙肝病毒在體內(nèi)存在的數(shù)量。

2、乙肝病毒是否復(fù)制。

3、乙肝是否傳染，傳染性有多強(qiáng)。

4、是否有必要服藥。

5、肝功能異常改變是否由病毒引起。

6、判斷病人是適合用哪類抗病毒藥物。

7、判斷藥物治療的療效。

臨床意義所以說(shuō)HBV—DNA定量檢測(cè)指標(biāo)降低在乙肝治療中有著非常重要的意義，是乙肝轉(zhuǎn)陰的前奏，也是康復(fù)最為關(guān)鍵的一步，只有體內(nèi)的HBV—DNA定量指標(biāo)降低，病毒的復(fù)制繁殖才會(huì)停止，乙肝的徹底治愈才有希望。

乙肝病毒DNA檢測(cè)的臨床意義一、對(duì)醫(yī)生的診斷和用藥非常重要。通過(guò)乙肝病毒DNA檢測(cè)能夠判定判斷乙肝患者適合用哪類抗病毒藥物；乙肝病毒DNA檢測(cè)對(duì)用藥的劑量、用藥時(shí)間、是否需要聯(lián)合用藥以及用藥的效果等提供重要的參考依據(jù)，也是臨床上評(píng)價(jià)抗病毒或免疫增強(qiáng)藥物療效的最客觀的指標(biāo)。

乙肝病毒DNA檢測(cè)的臨床意義二、能夠直接反映乙肝病毒復(fù)制狀態(tài)及傳染性的最佳指標(biāo)，通過(guò)乙肝病毒DNA的含量能直接反映病毒在體內(nèi)存在的數(shù)量、是否傳染，傳染性有多強(qiáng)。但是需要說(shuō)明的一點(diǎn)是：乙肝病毒載量的多少并不代表肝臟的損傷程度，也無(wú)法判斷病情的嚴(yán)重程度。

乙肝病毒DNA檢測(cè)的臨床意義三、反映病毒復(fù)制的活躍程度，間接地反映機(jī)體的免疫應(yīng)答水平。

復(fù)制過(guò)程不同于一個(gè)真正的生物體，病毒并不通過(guò)生長(zhǎng)和分裂等方式繁殖自身，而是像鑄造機(jī)器零件一樣，按照一定的模具拷貝出來(lái)的。病毒DNA中包含有一些程序，指導(dǎo)病毒的遺傳物質(zhì)和其它一些結(jié)構(gòu)蛋白組分增殖。另外，病毒DNA中還包含有一些信息，使得單一組分能夠在細(xì)胞因子的幫助下，自發(fā)組裝成新的病毒顆粒。

在醫(yī)學(xué)上，病毒的繁殖被稱之為“復(fù)制”，在復(fù)制的過(guò)程中，有兩個(gè)很重要的因素：一個(gè)是催化劑，另一個(gè)是模板。沒(méi)有這兩個(gè)因素，乙肝病毒就不能復(fù)制。乙肝病毒復(fù)制的“催化劑”就是乙肝病毒DNA（即HBV-DNA）聚合酶。沒(méi)有這種聚合酶的作用，乙肝病毒的復(fù)制就會(huì)停止。

乙肝病毒的基因組（HBV-DNA）是由兩條螺旋的DNA 鏈圍成的一個(gè)環(huán)形結(jié)構(gòu)。其中一條較長(zhǎng)負(fù)鏈已經(jīng)形成完整的環(huán)狀；另一條長(zhǎng)度較短的正鏈，呈半環(huán)狀。在感染肝細(xì)胞之后，這條半環(huán)狀的DNA鏈就會(huì)以負(fù)鏈為模板，在催化劑──HBV-DNA聚合酶的作用下延長(zhǎng)，最終形成完整的環(huán)狀。這時(shí)的乙肝病毒基因組就形成了一個(gè)完全環(huán)狀的雙股DNA。把這種DNA稱做共價(jià)閉合環(huán)狀DNA（即cccDNA），可以把它看作是病毒復(fù)制的原始模板。模板形成后，病毒基因會(huì)以其中的一條cccDNA為模板，利用肝細(xì)胞基因中的酶和DNA 聚合酶的“催化”，一段基因又一段基因地復(fù)制，形成負(fù)鏈和正鏈。最后再裝配到一起形成新的HBV-DNA顆粒。

第一步：黏附HBV人侵人體后，依靠其外膜(表面抗原，HBsAg)能粘附在肝細(xì)胞膜上，當(dāng)然，粘附的首要條件是HBsAg先要識(shí)別肝細(xì)胞膜。一旦粘附成功，HBv的外膜也就完成了它的使命，甩掉了外膜，HBV鉆進(jìn)肝細(xì)胞內(nèi)。

第二步:脫殼HBV核心部分來(lái)到肝細(xì)胞內(nèi)，在肝細(xì)胞漿中還要脫掉它的“核殼”(核心抗原即HBcAG及E抗原即HbEAG)，這樣，就暴露出了它最核心部分，即乙肝病毒核酸(HBv DNA)，HBV大有“赤膊上陣”之意。HBV-DNA包涵著乙肝病毒的全部基因，是它主宰著HBv的復(fù)制的。

第三步：入核HBv-DNA從肝細(xì)胞漿內(nèi)進(jìn)入肝細(xì)胞核，在這里它要進(jìn)一步發(fā)育完善，形成了HBv的“共價(jià)閉合環(huán)狀脫氧核塘核酸”(HBv cccDNA)。這個(gè)cccDNA十分了得，它深深藏匿在肝細(xì)胞核內(nèi)，而肝細(xì)胞核外面有一層堅(jiān)韌的核膜，藥物都難以通過(guò)這堅(jiān)韌的核膜，因而對(duì)cccDNA也無(wú)可奈何，但cccDNA卻掌控著HBv所有的遺傳信息，指令著HBv的復(fù)制。因此．現(xiàn)有的藥物想徹底消滅人體內(nèi)的HBv真比登天還難，這些藥物只能抑制HBv的繁殖或復(fù)制，“全部轉(zhuǎn)陰”也只能是一種幻想。

第四步：轉(zhuǎn)錄HBV在這一階段會(huì)以cccDNA為“模子”，像錄音帶似的把HBv cccDNA上的所有信息全都轉(zhuǎn)錄到“信息核糖核酸”(mRNA)上。這個(gè)轉(zhuǎn)錄過(guò)程需要人體內(nèi)的酶類幫忙，因?yàn)樗械牟《径疾荒茏约邯?dú)立生活．必須有生物的機(jī)體幫忙，才能完成這個(gè)轉(zhuǎn)錄過(guò)程。HBv也是這樣。在人體酶類的幫助下完成它的復(fù)制環(huán)節(jié)。

第五步：翻譯在mRNA上已錄取了HBv的所有信息，然后就是“翻譯”了，其實(shí)就是開始制造病毒蛋白。MRNA通過(guò)“翻譯”過(guò)程，可將HBv的各種蛋白制造出來(lái)，如HBv的外膜蛋白(HBsAg)、核殼蛋白(HBeAg、HBcAg)、HBvDNA多聚酶等；至此，HBv的外膜有了，HBv的核殼也有了，這些東西只是零件，飄浮游離著的，還有重要的HBv最核心部分沒(méi)有“制造”山來(lái)。

第六步：逆轉(zhuǎn)錄啥叫“逆轉(zhuǎn)錄””把HBv的遺傳信息從DNA轉(zhuǎn)錄到RNA上叫做“轉(zhuǎn)錄”，是正常的“順轉(zhuǎn)錄”；而將HBv的遺傳信息從RNA上再轉(zhuǎn)錄到DNA上，就叫做“逆轉(zhuǎn)錄”了。那么，HBv的mRNA上的遺傳信息最后就轉(zhuǎn)錄成了HBV的DNA，這時(shí)，HBv的最核心部分(即HBv DNA)也算制造完成。

第七步：組裝從第五步和第六步的復(fù)制看來(lái)，HBv的所有零件均已制作完畢，到了第七步也就簡(jiǎn)單了，把這些零件進(jìn)行組裝，裝配妥了，HBv的復(fù)制也算大功告成了。

HBv就是這樣繁殖或復(fù)制的?？雌饋?lái)好像挺復(fù)雜，其實(shí)HBv復(fù)制過(guò)程是很快的．一個(gè)復(fù)制周期不到48小時(shí)。復(fù)制出的下一代HBv或侵入另外的健康的肝細(xì)胞，或被釋放到血液中去，在人們抽血化驗(yàn)時(shí)也就被檢測(cè)到了。

建議檢測(cè)頻率無(wú)論是大三陽(yáng)還是小三陽(yáng)的病人，發(fā)現(xiàn)患有乙肝的時(shí)候就建議檢測(cè)HBV DNA。一般來(lái)說(shuō)，病人的具體情況可能會(huì)不太一樣，如果在一個(gè)病毒的活動(dòng)期，乙肝病毒DNA檢測(cè)可能需要勤一些，一到兩個(gè)月就應(yīng)檢測(cè)一次，如果是在病毒的耐受期，病情相對(duì)比較穩(wěn)定，可以3—6個(gè)月檢測(cè)一次。在進(jìn)行抗病毒治療的過(guò)程中，也是需要定期檢測(cè)HBV DNA。一般來(lái)說(shuō)至少三個(gè)月要檢查一次。

注意事項(xiàng)檢查注意事項(xiàng)：

1、 這個(gè)檢查與是否進(jìn)餐沒(méi)有任何關(guān)系,所以如果你只做HBV DNA檢查,可以檢查前進(jìn)餐.

2 、如果你還要做肝功能檢查，建議你在檢查前避免進(jìn)，避免熬，避免酗酒,避免用藥,女性生理期避免做肝功能檢查。

對(duì)于乙肝結(jié)果的認(rèn)識(shí)，有這幾點(diǎn)注意事項(xiàng)：

1、關(guān)于單位的換算.最常見的單位是copies/ml,也有重量的單位,比如fg/ml,pg/ml.1 pg = 1000 fg,那么1 pg/ml = 283,000 copies/ml.

2、由于PCR的方法雖然精確度，但是誤差相對(duì)較大,而且假陽(yáng)性率也比較，所以，對(duì)于每次乙肝DNA檢查的結(jié)果,在兩個(gè)數(shù)量級(jí)之內(nèi)的變化，通常會(huì)認(rèn)為沒(méi)有變化或變化不大.而且DNA也在不斷的波動(dòng),所以不能以一次或兩次的檢查結(jié)果就簡(jiǎn)單的判斷是否好轉(zhuǎn)，應(yīng)該綜合其它結(jié)果以及DNA的變化趨勢(shì)。

3、對(duì)于乙肝陰性的標(biāo)準(zhǔn),我們一般認(rèn)為是10的3次方,但不能一概而論,應(yīng)該視化驗(yàn)單上具體給出的參考值而定.陰性最準(zhǔn)確的表達(dá)方式是,未檢測(cè)到,化驗(yàn)單表示為1x10E3 copies/ml。

6、“－”：陰性，病毒的復(fù)制程度低于檢測(cè)限。對(duì)應(yīng)于定量方式中HBV-DNA1000copies/ml，常提示病毒有復(fù)制，而且拷貝數(shù)的高低與病毒復(fù)制的程度成正相關(guān);若結(jié)果陰性，則表明病毒處于不活躍階段，病情比較平穩(wěn)。

2、乙肝病毒DNA檢測(cè)：判斷乙肝病毒傳染性強(qiáng)度的重要指標(biāo)：一般來(lái)說(shuō)如乙肝病毒DNA測(cè)定值>1000copies/ml，常提示具有傳染性，且檢測(cè)值越高就說(shuō)明乙肝病毒復(fù)制越活躍，傳染性越強(qiáng)。

3、乙肝病毒DNA檢測(cè)可為臨床治療提供可靠的依據(jù)：乙肝抗病毒治療的標(biāo)準(zhǔn)為乙肝病毒DNA>1000copies/ml，且轉(zhuǎn)氨酶升高超過(guò)正常值兩倍以上者;對(duì)一些肝臟有進(jìn)行性損害(經(jīng)肝穿活檢證實(shí))、乙肝病毒dna陽(yáng)性者，即使肝功能正常，必要時(shí)也應(yīng)考慮抗病毒治療。

4、可評(píng)價(jià)乙肝抗病毒治療效果的依據(jù)：在治療過(guò)程中應(yīng)定期檢測(cè)、記錄乙肝DNA的檢測(cè)結(jié)果，以作比較，觀察抗病毒療效，如抗病毒治療3個(gè)月或半年，乙肝病毒DNA仍不轉(zhuǎn)陰或下降少于2次方，則提示該藥物抗病毒療效欠佳，可考慮停藥或換用其他抗病毒藥。

5、其他：乙肝病毒DNA檢測(cè)結(jié)果在一定程度上可以輔助判斷乙肝病毒是否產(chǎn)生了變異，如在治療過(guò)程中乙肝病毒dna檢測(cè)結(jié)果由陰性轉(zhuǎn)為陽(yáng)性時(shí)，則提示病毒已發(fā)生變異，應(yīng)結(jié)合具體病情重新選擇抗病毒藥物。

本詞條內(nèi)容貢獻(xiàn)者為:

成玉林 - 副教授 - 重慶大學(xué)